負壓救護車首先得將醫療艙和駕駛艙隔離，保證駕駛者的生命。負壓救護車除了具備普通救護車的專業救護設備以外，還可以保證醫療艙的衛生，具有隔離性、防腐性、通風性和耐菌性。通過車內的負壓裝置，使車內的氣壓低于外界大氣壓（通常為-20Pa甚至更低），讓空氣自由流動時只能由車外流向車內，并將車內空氣進行無害化處理后排出。從醫療艙中抽出的氣體會經過過濾裝置排到車外，而過濾裝置可以阻擋并殺滅99.97%的直徑在0.3微米以上的病菌。使負壓艙內形成一個固定的空氣流通區域。空氣由清潔區（醫務人員區）、流向感染源區（病人區），并將艙內空氣壓力維持在-10Pa～-120Pa之間，使空氣流的死角和漩渦流小。
那么和患者在同一個醫療艙內的醫護人員就不怕被感染嗎？這時就要說到負壓救護車的空氣循環系統，它保證了清潔空氣自上而下流動，使得新鮮空氣首先經過醫護人員再到平躺的患者，后經過患者頭部附近的過濾裝置流出車外。裝備更齊全的負壓救護車還會配備專用的隔離艙，患者平躺在隔離艙內，通過隔離艙的風機進行呼吸。 針對傳染性極強的患者，車內還需要另外配備負壓隔離擔架，將病人完全置于單獨的負壓隔離艙內，病人在隔離艙內呼出的氣體過濾后才排出到醫療艙，醫療艙的空氣在經過負壓裝置過濾后再排到車外。限度地減少病人和醫護人員同處一室發生交叉感染的風險，同時也減少病人在進出救護車前后的空窗期，感染其他人員的風險。